| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请/专利号： | CN202510078306.7 |
| 申请日期： | 2025-01-17 |
| 公告/公开号： | CN119799823A |
| 公开日期： | 2025-04-11 |
| 主分类号： | C12P19/60(2006.01);C;C12;C12P;C12P19 |
| 分类号： | C12P19/60(2006.01);C12N15/70(2006.01);C12N15/56(2006.01);C12N1/21(2006.01);C12R1/19(2006.01);C12P19/60;C12N15/70;C12N15/56;C12N1/21;C12R1/19 |
| 申请/专利权人： | 山西大学 |
| 发明/设计人： | 李彬春;王露 |
| 主申请人地址： | 030801 山西省太原市小店区坞城路92号 |
| 专利代理机构： | 北京圣州专利代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 李玉芝 |
| 国别省市代码： | 山西;14 |
| 主权项： | 1.嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌在全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I中的应用，其特征在于，嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌的制备方法如下：合成密码子优化后的PfBgl基因序列，之后通过无缝克隆技术将其克隆至pET-28a载体上，将验证基因序列正确的重组质粒pET28a-PfBgl转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。 2.根据权利要求1所述的嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌在全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I中的应用，其特征在于：所述嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌作为全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I中的生物催化剂。 3.一种全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法，利用权利要求1中所述的嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌为生物催化剂，其特征在于，步骤如下： S1、配制反应体系，包括pH6.050mM的磷酸缓冲液、3.33mM淫羊藿苷溶液、20mg/mL嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌重悬液； S2、将反应体系于37℃、200rpm条件下反应，反应结束后离心弃上清，加入甲醇溶解沉淀，离心取上清，于50℃条件下旋转蒸发甲醇，然后于45℃烘干即得宝藿苷I。 4.根据权利要求3所述的一种全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法，其特征在于：所述步骤S1的反应体系中磷酸缓冲液：淫羊藿苷溶液：嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌重悬液的体积比为13:6:1。 5.根据权利要求3所述的一种全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法，其特征在于：所述步骤S1中淫羊藿苷溶液为将淫羊藿苷溶解于热甲醇中。 6.根据权利要求3所述的一种全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法，其特征在于：所述步骤S2中反应体系于37℃、200rpm条件下反应40-240min，离心条件为35℃、8000rpm离心30min。 7.根据权利要求3所述的一种全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法，其特征在于，所述步骤S1中嗜热β-D-葡萄糖苷酶PfBgl大肠杆菌工程菌重悬液的制备方法为： S11、进行种子液培养，采用2×YT培养基于37℃、210rpm条件下过夜培养； S12、扩大培养，采用2×YT培养基于37℃、180rpm条件下培养至菌液OD600为0.9-1.0； S13、IPTG诱导表达，加入IPTG后于16℃、180rpm诱导表达过夜； S14、4℃、8000rpm离心10min取沉淀，采用pH8.050mM磷酸缓冲液重悬即可。 8.根据权利要求7所述的一种全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法，其特征在于：所述步骤S11和步骤S12中的2×YT培养基含50μg/mL硫酸卡那霉素，接种量均为1％体积。 9.根据权利要求7所述的一种全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法，其特征在于：所述步骤S13中IPTG的终浓度为0.5mM。 10.一种如权利要求3-9任一项所述的全细胞生物转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的方法在宝藿苷I制备中的应用。 |